Fosfatasa alcalnna (alp) y runx2 en cultivos ceulares de osteoblastos estimulaados con campo eléctrcoo / Alkaline hosphattase (alp) and runx2 in cell cultures stiulated osteoblaasts electric field / Fosfatase alcainna (alp) e runx2 em cultivos celulares de osteoblastos estimulados com campo elétrcoo

El objeto de este estudio fue identificar el estímulo eléctrico que debe aplicarse en cultivos celulares de osteoblastos (Ob) para aumentar la expresión del gen de Fosfatasa Alcalina (ALP) y el factor de transcripción Runx2. Se cultivaron Ob de la American Type Culture Collection (ATCC) Ref. CRL 11372. Los cultivos se estimularon del día cinco, cuando las células presentaron confluencia, hasta el día ocho. El estímulo aplicado a cada grupo experimental fue de 100mV, 200mV, 300mV, 400mV y 500mV respectivamente, se cultivó un grupo control no estimulado con cada grupo experimental. El campo eléctrico se generó con corriente alterna (AC) y se aplicó mediante dos placas de aluminio ubicadas de forma lateral y paralela a los frascos de cultivo de 25cm2. Los niveles de expresión de mRNA se midieron con la técnica quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). Con la aplicación de campo generado con AC aumentó la expresión del factor de transcripción RunX2 en proporción directa al aumento del voltaje aplicado. La expresión del gen de ALP fue inversamente proporcional a la aplicación del estímulo y se identificó una diferencia significativa entre la presencia y ausencia del estímulo, siendo mayor en ausencia del estímulo. El campo eléctrico generó una señal que puede aumentar o disminuir la expresión de los genes que median la formación de tejido óseo. En el caso de Runx2, favoreció la diferenciación de células mesenquimales a Ob con la consecuente actividad de remodelación y formación del tejido óseo.

The purpose of this study was to identify the electrical fields to be applied in osteoblast (Ob) cell cultures, in order to increase the expression of Alkaline Phosphatase (ALP) gene and the transcription factor Runx2. Ob cultured where from the American Type Culture Collection (ATCC) Ref CRL 11372. Cell Cultures received stimulation at day five, when they showed a confluent monolayer organization until day eight. The stimulus applied to each experimental group was 100mV, 200mV, 300mV, 400mV and 500mV respectively, a control group was cultured without stimulation. The electric field is generated with altern current (AC) and applied with two aluminum plates located parallel to 25cm2 culture flasks. The mRNA expression levels were measured by reverse transcription quantitative technique polymerase chain reaction (qRT-PCR). Aplication of AC increased expression of transcription factor RunX2 in direct proportion to the applied voltage. The ALP gene expression was inversely proportional to the stimulus. Electric field can increase or decrease the expression of genes that mediate the formation of bone tissue. Favoring differentiation of mesenchymal cells to Ob.

O objeto deste estudo foi identificar o estímulo elétrico que deve ser aplicado em cultivos celulares de osteoblastos (Ob) para aumentar a expressão do gene da Fosfatase Alcalina (ALP) e o fator de transcrição Runx2. Foram cultivados Ob da American Type Culture Collection (ATCC) Ref. CRL 11372. Os cultivos foram estimulados a partir do quinto dia, quando as células apresentaram confluência, até o oitavo dia. O estímulo aplicado a cada grupo experimental foi de 100mV, 200mV, 300mV, 400mV e 500mV respectivamente, cultivou-se um grupo de controle não estimulado com cada grupo experimental. O campo elétrico foi gerado com corrente alternada (CA) e aplicou-se mediante duas placas de alumínio localizadas de forma lateral e paralela aos frascos de cultivo de 25cm2. Os níveis de expressão de mRNA foram medidos com a técnica quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). Com a aplicação do campo gerado com AC aumentou a expressão do fator de transcrição RunX2 em proporção direta ao aumento da voltagem aplicada. A expressão do gene de ALP foi inversamente proporcional à aplicação do estímulo e identificou-se uma diferença significativa entre a presença e ausência do estímulo, sendo maior na ausência do estímulo. O campo elétrico gerou um sinal que pode aumentar ou diminuir a expressão dos genes que mediam a formação de tecido ósseo. No caso de Runx2, favoreceu a diferenciação de células mesenquimais a Ob com a consequente atividade de remodelação e formação do tecido ósseo.

Carga mecánica oomo regulador de la osteogénesis en células madre mesenquimales humaaas / Mechanicl stresss as osteogenesis regulator in human mesenchymal stem cells / Carga mecânic coomo regulador da osteogênese em célulastronco mesenquimais humanas

El papel de la estimulación mecánica en la diferenciación de las células madre mesenquimales humanas (CMMHs) es una alternativa terapéutica para aplicaciones en ingeniería tisular. Este estudio evaluó el efecto de cargas mecánicas sobre la diferenciación de las CMMHs, y los mecanismos celulares que intervienen en el proceso de mecanotransducción. Las CMMHs se sembraron en frascos de cultivo de 75cm2 y fueron expuestas a tensión uniaxial de deformación de 500, 1000, 1500 y 2000 micro strains (με), con una intensidad de 9 ciclos/minuto por 3 horas durante 4 días consecutivos. Se evaluó la actividad transcripcional de los factores de transcripción Runx2 y Sox9 y de los genes de Osteocalcina (OC), Colágeno tipo 1 (Col1) y Fosfatasa Alcalina (ALP). Después de la exposición al estímulo, los marcadores osteogénicos Col1, OC, y ALP se expresaron temporalmente; y los factores de transcripción Runx2 y Sox9 disminuyeron la expresión con respecto a las células de grupo control (sin estímulo), sugiriendo que el estímulo mecánico indujo la diferenciación de las células CMMHs a linaje osteoblástico. La identificación de los genes que traducen los estímulos mecánicos en las CMMHs y modulan la diferenciación osteogénica, tienen proyección directa en medicina regenerativa a través del desarrollo y perfeccionamiento del enfoque de ingeniería de tejidos funcionales.

The role of mechanical stimulation for mesenchymal stem cells (MSCs) differentiation is a therapeutic alternative for applications in tissue engineering. The aim of this study was to evaluate the effect of mechanical strain on the differentiation and cellular mechanisms of mechanotransduction in MSCs. The cells were seeded in 75cm2 culture flasks and then exposed to uniaxial mechanical tensile strain of 500, 1000, 1500 and 2000 micro strains (με), 9 cycles / minute during 3 hours for 4 consecutive days. Runx2 and Sox9 transcription factors andOsteocalcin (OC), Collagen Type 1 (Col1) and Alkaline Phosphatase (ALP) gene expression was ascertained. After exposure to mechanical strain, osteogenic marker genes Col1, OC, and ALP were expressed temporally, while Runx2 and Sox9 transcription factors expression decreased, compared with control cells without stimulation, suggesting that mechanical stimulus induced differentiation of mesenchymal stem cells into osteoblast lineage. Identification of genes that translate mechanical stimuli in MSCs and modulate osteogenic differentiation hasimportant implications in regenerative medicine as an approach to functional tissue engineering.

O papel da estimulação mecânica na diferenciação das célulastronco mesenquimais humanas (CMMHs) é uma alternativa terapêutica para aplicações em engenharia tissular. Este estudo avaliou o efeito de cargas mecânicas sobre a diferenciação das CMMHs, e os mecanismos celulares que intervém no processo de Mecanotransdução. As CMMHs foram cultivadas em frascos de cultivo de 75cm2 e foram expostas a tensão uniaxial de deformação de 500, 1000, 1500 e 2000 micro strains (με), com uma intensidade de 9 ciclos/minuto por 3 horas durante 4 dias consecutivos. Foi avaliada a atividade transcricional dos fatores de transcrição Runx2 e Sox9 e dos genes de Osteocalcina (OC), Colágeno tipo 1 (Col1) e Fosfatase Alcalina (ALP). Depois da exposição ao estímulo, os marcadores osteogênicos Col1, OC, e ALP foram expressos temporariamente; e os fatores de transcrição Runx2 e Sox9 diminuíram a expressão em comparação com as células do grupo controle (sem estímulo), sugerindo que o estímulo mecânico induziu a diferenciação das células CMMHs à linhagem osteoblástica. A identificação dos genes que traduzem os estímulos mecânicos nas CMMHs e modulam a diferenciação osteogênica, têm projeção direta na medicina regenerativa através do desenvolvimento e aperfeiçoamento do enfoque de engenharia de tecidos funcionais.

Análisis mutacional del gen MSX1 en pacientes con FLPNS e hipodoncia / Mutation analysis of MSX1 gene in patients with NSCLP and hypodontia

Introducción. La etiología de la hendidura labio-palatina es compleja e involucra factores genéticos y ambientales. Además de la hendidura, numerosos estudios han reportado la presencia de anomalías dentales en asociación con varias formas de hendidura labial,palatina o ambas; entre estas anomalías se ha encontrado la prevalencia de agenesia dental. La idea de que los mismos factores etiológicos que causan la formación de la hendidura afectan el desarrollo de la dentición, es apoyada por varios autores que proponen al genMSX1 como candidato para estos dos fenotipos. Una mutación nonsense (Ser104stop) en el exon 1 del gen MSX1 se encontró en una familia danesa, en la que unos miembros presentaban agenesia dental o hendidura palatina y otros presentaban las dos entidadesasociadas. A pesar de que se han realizado varios estudios sobre anomalías dentales en pacientes con hendidura labio-palatina y existen estudios que confirman a MSX1 como ungen candidato tanto para hipodoncia como para hendiduras oro-faciales, la interpretación de los resultados ha sido muy compleja. Objetivo. Determinar la presencia de la mutación reportada en pacientes colombianos con hendidura labio-palatina e hipodoncia. Materiales y métodos. Se analizaron 30 pacientes, 22 con hendidura labio-palatina y 8 sólo con hipodoncia, y 60 controles sanos, mediante exámenes clínicos y radiográficos; se les tomaron muestras de sangre por venopunción, se extrajo el ADN y se realizó amplificación por la técnica de PCR del exón 1. Posteriormente, se llevó a cabo un análisis de restricción. Resultados. De los pacientes con hendidura labio-palatina, 16 presentaron agenesias dentalesfuera y dentro del área de hendidura, la mayoría fueron laterales y premolares superiores. La mayoría de los pacientes con hipodoncia únicamente, presentaron ausencias de incisivos. Además, presentaron otras anomalías dentarias, como micrognatismo, dientes supernumerarios y prognatismo mandibular...

Introduction: The etiology of non-syndromic cleft lip palate is complex and involves genetic and environmental factors. Additional to the fissure itself, numerous studies have reported the presence of dental anomalies with various forms of cleft lip, cleft palate or both. The prevalence of dental agenesis has been found within these anomalies. The idea that the same etiology factors which cause the formation of the cleft affect the dental development is supported by various authors who propose the MSX1 gene to be the candidate for these two phenotypes. A nonsense mutation in the exon 1 of the MSX1 gene was found in a Danish family in which one of the members presented dental agenesis and/or cleft palate and others presented both entities. Although various studies have been associated reported with respect to dental anomalies in patients with nonsyndromic cleft lip palate and there are studies which confirm MSX1 as a candidate gene for hypodontia and orofacial fissures, the interpretation of the results has been very complex.Objective: To determine the presence of the mutation reported in Colombian patients with nonsyndromic cleft lip palate and hypodontia. Materials and methods: 30 patients, 22 with non-syndromic cleft lip palate and 8 with only hypodontia and 60 healthy patients were clinically and radiographically analyzed. Blood samples were taken through venopunction, the DNA was extracted and the PCR technique was utilized. Afterwords, the restriction analysiswas carried out...